Transferimi i energjisë me rezonancë fluoreshence (FRET)
Transferimi i energjisë me rezonancë fluoreshence (FRET) është një proces transferimi i energjisë jo-rrezatuese në të cilin energjia e gjendjes së ngacmuar të dhuruesit transferohet në gjendjen e ngacmuar të pranuesit përmes ndërveprimit të çifteve elektrike ndërmolekulare.Ky proces nuk përfshin fotone dhe për këtë arsye është jo-rrezatues.Kjo analizë ka avantazhet e të qenit i shpejtë, i ndjeshëm dhe i thjeshtë.
Ngjyra e përdorur në analizën FRET mund të jetë identike.Por në shumicën e aplikacioneve, në të vërtetë përdoren ngjyra të ndryshme.Shkurtimisht, transferimi i energjisë së rezonancës ndriçuese është transferimi i një çifti dipolesh nga dhuruesi (ngjyra 1) te marrësi (ngjyra 2) kur grupi dhurues është i ngacmuar.Në përgjithësi, spektri i emetimit të grupit fluorofor Donator mbivendoset me spektrin e absorbimit të grupit Pranues."Kur distanca midis dy fluoroforeve është e përshtatshme (10-100 A), mund të vërehet transferimi i energjisë fluorofore nga dhuruesi te marrësi."Metoda e transferimit të energjisë varet nga struktura kimike e receptorit:
1. Shndërrohet në dridhje molekulare, domethënë, drita shkëlqyese e transferimit të energjisë zhduket.(Receptori është një shuarës i dritës)
2. Emetimi është më intensiv se vetë receptori, duke rezultuar në një zhvendosje të kuqe në spektrin dytësor të fluoreshencës.(Receptorët janë emetues ndriçues).
Grupi dhurues (EDANS) dhe gjeni pranues (DABCYL) janë të lidhur në mënyrë uniforme me substratin natyral të proteazës HIV dhe kur substrati nuk shkëputet, DABCYL mund të shuajë EDANS dhe më pas të bëhet i padetektueshëm për fluorin.Pas shkëputjes së proteazës HIV-1, EDANS nuk shuhet më nga DABCYL dhe luciferazat EDANS mund të zbulohen më pas.Disponueshmëria e frenuesve të proteazës mund të monitorohet nga ndryshimet në intensitetin e fluoreshencës së EDANS.
Peptidet FRET janë mjete të përshtatshme për të studiuar jospecifikitetin e peptidazës.Meqenëse procesi i reagimit të tij mund të monitorohet vazhdimisht, ai ofron një metodë të përshtatshme për zbulimin e aktivitetit të enzimës.Shkëlqimi i prodhuar pas hidrolizës së lidhjeve peptide nga dhuruesi/pranuesi siguron një masë të aktivitetit të enzimës në përqendrime nanomolare.Kur peptidi FRET është i paprekur, ai tregon një zhdukje të papritur të ndezjes së brendshme, por kur ndonjë lidhje peptide përballë dhuruesit/pranuesit prishet, ai lëshon një blic, i cili mund të zbulohet vazhdimisht dhe aktiviteti i enzimës mund të matet më pas.
Koha e postimit: Gusht-14-2023