Si një instrument me precizion të lartë, HPLC mund të çojë lehtësisht në disa probleme të vogla shqetësuese nëse nuk përdoret në mënyrën e duhur gjatë përdorimit.Një nga problemet më të zakonshme është problemi i ngjeshjes së kolonës.Si të zgjidhni shpejt një kromatograf me defekt.Sistemi HPLC përbëhet kryesisht nga një shishe rezervuari, një pompë, një injektor, një kolonë, një dhomë e temperaturës në kolonë, një detektor dhe një sistem përpunimi të të dhënave.Për të gjithë sistemin, shtyllat, pompat dhe detektorët janë komponentët kryesorë dhe vendndodhjet kryesore që janë të prirura ndaj problemeve.
Çelësi i presionit të kolonës është zona që kërkon vëmendje të madhe kur përdoret HPLC.Stabiliteti i presionit të kolonës është i lidhur ngushtë me formën e pikut kromatografik, efikasitetin e kolonës, efikasitetin e ndarjes dhe kohën e mbajtjes.Stabiliteti i presionit të kolonës nuk do të thotë që vlera e presionit është e qëndrueshme në një vlerë të qëndrueshme, por përkundrazi që diapazoni i luhatjes së presionit është midis 345 kPa ose 50 PSI (duke lejuar përdorimin e elucionit të gradientit kur presioni i kolonës është i qëndrueshëm dhe ndryshon ngadalë).Presioni shumë i lartë ose shumë i ulët është një problem i presionit të kolonës.
Më të prirur ndaj dështimeve dhe zgjidhjeve të HPLC
1, presioni i lartë është problemi më i zakonshëm në përdorimin e HPLC.Kjo do të thotë një rritje e papritur e presionit.Në përgjithësi, ekzistojnë arsyet e mëposhtme: (1) Në përgjithësi, kjo është për shkak të bllokimit të kanalit të rrjedhës.Në këtë pikë, ne duhet ta shqyrtojmë atë pjesë-pjesë.a.Së pari, prisni hyrjen e pompës së vakumit.Në këtë pikë, tubi PEEK u mbush me lëng në mënyrë që tubi PEEK të ishte më i vogël se shishja e tretësit për të parë nëse lëngu po pikonte sipas dëshirës.Nëse lëngu nuk pikon ose pikon ngadalë, koka e filtrit të tretësit bllokohet.Trajtimi: Zhyteni në acid nitrik 30% për gjysmë ore dhe shpëlajeni me ujë ultra të pastër.Nëse lëngu pikon rastësisht, koka e filtrit të tretësit është normale dhe po kontrollohet;b.Hapni valvulën e pastrimit në mënyrë që faza e lëvizshme të mos kalojë nëpër kolonë dhe nëse presioni nuk ulet ndjeshëm, koka e bardhë e filtrit bllokohet.Trajtimi: Pikat e bardha të filtruara u hoqën dhe u sonikuan me 10% izopropanol për gjysmë ore.Duke supozuar se presioni bie nën 100 PSI, koka e bardhë e filtruar është normale dhe po kontrollohet;c.Hiqni skajin e daljes së kolonës, nëse presioni nuk ulet, kolona bllokohet.Trajtimi: Nëse bëhet fjalë për bllokim të kripës buferike, shpëlajeni 95% derisa presioni të jetë normal.Nëse pengimi shkaktohet nga ndonjë material më i ruajtur, duhet të përdoret një rrjedhje më e fortë se faza aktuale e lëvizshme për të nxituar drejt presionit normal.Nëse presioni afatgjatë i pastrimit nuk ulet sipas metodës së mësipërme, hyrja dhe dalja e kolonës mund të konsiderohen të lidhura me instrumentin përkundrazi dhe kolona mund të pastrohet me fazën e lëvizshme.Në këtë kohë, nëse presioni i kolonës ende nuk është ulur, pllaka e sitës së hyrjes së kolonës mund të zëvendësohet vetëm, por pasi funksionimi nuk është i mirë, është e lehtë të çoni në uljen e efektit të kolonës, prandaj përpiquni të përdorni më pak.Për probleme të vështira, mund të merret parasysh zëvendësimi i kolonës.
(2) Vendosja e gabuar e shpejtësisë së rrjedhës: Shpejtësia e saktë e rrjedhës mund të rivendoset.
(3) Raporti i pasaktë i rrjedhës: indeksi i viskozitetit të përmasave të ndryshme të rrjedhave është i ndryshëm, dhe presioni përkatës i sistemit të rrjedhës me viskozitet më të lartë është gjithashtu më i madh.Nëse është e mundur, tretësit me viskozitet më të ulët mund të zëvendësohen ose të rivendosen dhe të përgatiten.
(4) Zhvendosja e presionit zero të sistemit: rregulloni zeron e sensorit të nivelit të lëngut.
2, presioni është shumë i ulët (1) zakonisht shkaktohet nga rrjedhjet e sistemit.Çfarë duhet të bëni: Gjeni çdo lidhje, veçanërisht ndërfaqen në të dy skajet e kolonës dhe shtrëngoni zonën e rrjedhjes.Hiqni shtyllën dhe shtrëngoni ose rreshtoni filmin PTFE me forcën e duhur.
(2) Gazi hyn në pompë, por presioni është zakonisht i paqëndrueshëm në këtë kohë, i lartë dhe i ulët.Më seriozisht, pompa nuk do të jetë në gjendje të thithë lëngun.Metoda e trajtimit: hapni valvulën e pastrimit dhe pastroni me një shpejtësi rrjedhjeje prej 3~5 ml/min.Nëse jo, flluskat e ajrit u aspiruan në valvulën e shkarkimit duke përdorur një tub të veçantë gjilpëre.
(3) Nuk ka dalje të fazës së lëvizshme: kontrolloni nëse ka një fazë të lëvizshme në shishen e rezervuarit, nëse lavamani është i zhytur në fazën e lëvizshme dhe nëse pompa është duke punuar.
(4) Valvula e referencës nuk është e mbyllur: valvula e referencës mbyllet pas ngadalësimit.Zakonisht zbret në 0.1.~ 0.2mL/min pas mbylljes së valvulës së referencës.
Përmbledhje:
Në këtë punim, analizohen vetëm problemet e zakonshme në kromatografinë e lëngët.Sigurisht, në aplikimin tonë praktik, do të hasim edhe më shumë probleme të tjera.Në trajtimin e gabimeve, ne duhet të ndjekim parimet e mëposhtme: të ndryshojmë vetëm një faktor në një kohë për të përcaktuar marrëdhënien midis faktorit hipotetik dhe problemit;Në përgjithësi, kur zëvendësojmë pjesët për zgjidhjen e problemeve, duhet t'i kushtojmë vëmendje vendosjes së pjesëve të paprekura të çmontuara përsëri në vend për të parandaluar mbeturinat;Formimi i një zakoni të mirë të regjistrimit është çelësi i suksesit të trajtimit të gabimeve.Si përfundim, kur përdorni HPLC, është e rëndësishme t'i kushtohet vëmendje paratrajtimit të mostrës dhe funksionimit dhe mirëmbajtjes së duhur të pajisjes.
Koha e postimit: Shtator-18-2023