Pasqyrë e shprehjes së proteinave

shprehja e proteinave i referohet teknologjisë së riprodhimit të gjenit të synuar në një vektor artificial dhe më pas futjes së tij në qelizën marrëse ose sistemin pa qelizë për të shprehur proteinën në sistemin heterolog.

Shprehja e proteinave mund të zgjidhë problemin që proteinat vendase janë të vështira për t'u marrë. Që nga krijimi i parë i shprehjes së proteinave heterologe në vitet 1970, mijëra proteina rekombinante janë shprehur me sukses, gjë që promovon në mënyrë efektive zhvillimin e vazhdueshëm të bioteknologjisë dhe kërkimit biomjekësor dhe industrisë.

Objektivi:

Nëpërmjet shprehjes së proteinave, së pari është e mundur të merren proteina që janë të vështira për t'u marrë nga burimet natyrore.

Së dyti, grupi i madh dhe pastërtia e lartë e produkteve të shprehjes së proteinave jo vetëm që lehtësojnë analizën e proteinës së synuar, por gjithashtu ulin shumë koston.

Më e rëndësishmja, proteinat rekombinante zakonisht zgjidhen për të treguar një biosiguri të lartë të qelizës pritëse, duke shmangur kështu disa rreziqe të mundshme biosigurie të bujtësit patogjen.

Metoda:

Ai përfshin kryesisht proceset e replikimit të fragmentit të gjenit, futjen në sistemin e shprehjes, shprehjen e induktuar, pastrimin dhe analizën e produktit.

Pasqyrë e shprehjes së proteinave

Klasifikimi:

Sistemet e shprehjes së proteinave në përgjithësi mund të ndahen në:

1. Sistemi i shprehjes bërthamore: Escherichia coli është sistemi më i zakonshëm i shprehjes së proteinave, i cili ka avantazhet e sfondit të qartë gjenetik, riprodhimit të përshtatshëm, kostos së ulët dhe shprehjes së lartë. Megjithatë, i mungon mekanizmi i modifikimit të përkthimit dhe nuk është i përshtatshëm për glikozilim ose ndarje të pikave të veçanta të përzgjedhjes për të modifikuar shprehjen e proteinave. Bacillus subtilis mund të përdoret gjithashtu për shprehjen e proteinave dhe avantazhet e tij janë aftësia e fortë e shprehjes metabolike dhe aktiviteti i ulët i proteazës, i cili gradualisht ka tërhequr vëmendjen.

2. Sistemi i shprehjes eukariote: pas përkthimit mund të arrihet një shkallë e caktuar e glikozilimit, e cila është më afër aktivitetit natyror të proteinave eukariote. Kryesisht është i përfshirë. ① Sistemi i shprehjes së majave (maja e kuqe e zakonshme, maja e birrës, etj.), Maja mund të jetë e butë me densitet të lartë, mund të modifikohet pas përkthimit, ka avantazhet e qelizave pritëse prokariotike dhe eukariote, dhe është gjithashtu një sistem i mirë i shprehjes së proteinave. ② Sistemi i shprehjes së qelizave të insekteve: gjenet ekzogjene transfektohen në qelizat e insekteve nga vektori bakulovirus për shprehje. Është një sistem me shprehje të lartë për proteinat eukariote, i cili është i përshtatshëm për proteinat e membranës, proteinat makromolekulare, protein kinazat dhe proteinat e tjera që janë të vështira për t'u shprehur në sistemin prokariotik. ③ Sistemi i shprehjes së qelizave të gjitarëve: efikasiteti i përkthimit dhe dekorimit të qelizave të gjitarëve është shumë më i lartë se ai i sistemeve të qelizave të majave dhe insekteve. Struktura dhe funksioni i qelizave të gjitarëve janë më afër proteinave eukariote vendase, por niveli i shprehjes është i ulët dhe kostoja është e lartë.

3. Sistemi i shprehjes pa qeliza: proteinat e synuara mund të shprehen drejtpërdrejt nga grimcat dhe produktet PCR, dhe sistemi i shprehjes është ekstrakte pa qeliza nga Escherichia coli, embrionet e grurit, retikulocitet lepuri, etj. Përparësitë e shprehjes së proteinave pa qeliza janë aftësia për të shprehur produkte që janë të vështira për t'u shprehur në sisteme të tjera, dhe automatizimi i lartë, me kosto të ulët dhe të lartë, nëpërmjet shprehjes së lartë.